熒光PCR凍干-DTT

二硫蘇糖醇（簡稱為DTT）是一種小分子有機還原劑，其還原狀態(tài)下為線性分子。DTT有什么特點？怎么保存呢？DTT是一種常用還原劑，有抗氧化作用，進口分裝。DTT和巰基乙醇相比， DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時，兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化， DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制成的復合型添加劑，按照一定比例配比，能獲得PCR擴增特異性和很高的PCR擴增產量。PCR的擴增反應并不是可以無窮地進行下去的，經過一定的循環(huán)周期后需擴增的片段不再按指數(shù)增多而逐漸進入平坡；進入平坡的循環(huán)次數(shù)，取決于起始時存在的模板拷貝數(shù)以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環(huán)的后期，合成產物達0.3～1pmol時，由于產物的堆積，使原來以指數(shù)增加的速率變成平坦的曲線。

試劑凍干機Pilot3-6T應用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開發(fā)，采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩(wěn)定性測試。
7. 根據穩(wěn)定性測試結果修正工藝或配方。
8. 整個環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設備、人員的結合。